对于多柔比星所致心肌损伤芪参益气滴丸的疗

提要：化疗药物导致的心肌损伤十分常见。蒽环类抗癌化疗药物具有很强的心脏毒性，其中以ADR导致的心肌损伤最为严重。辅酶Q10、维生素E、维生素C、三磷酸腺苷、乙酰半胱氨酸和维拉帕米可保护心肌，并预防和降低心脏毒性。对于中药是否能控制化疗诱发的心肌损伤及其可能机制，尚无相关文献报导。研究结果显示，ADR诱发心肌病的小鼠模型成功建立。即使心脏致毒药物已经使用了很长时间，芪参益气滴丸仍可改善小鼠左心室功能，且应用的时机越早越好。心肌HE染色显示ADR+芪参益气各组的心肌组织的结构性损伤轻于ADR组，这同样证实了芪参益气滴丸对ADR诱发心肌损伤的心肌保护作用。本实验表明，应用中药芪参益气滴丸能够有效治疗ADR诱发的心肌病，这可能与心肌细胞凋亡减少有关。摘译自《中国天然药物》（ChinJNatMed,11:）对于多柔比星所致心肌损伤芪参益气滴丸的疗效及可能机制中国医学论坛报，-04-10第C-07版：循环周刊医院童嘉毅心肌病的主要特征是心肌损伤和坏死，同时伴发心律失常和心功能障碍。对于心肌病，目前尚未出现有效疗法，只能对症治疗，且无法扭转病程。此外，心肌病的临床预后很差。药物诱发心肌损伤是心肌病的重要危险因素，多柔比星（ADR，即阿霉素）即为可诱发心肌损伤的最常用化疗药物之一。因此，探索ADR诱发心肌损伤的有效预防和治疗手段颇为重要。芪参益气滴丸目前广泛用于治疗冠心病，但缺乏基础研究和用于心肌病治疗的临床应用经验。本实验性研究的目的是考察芪参益气滴丸治疗小鼠因ADR诱发心肌损伤的疗效和机制，从而为心肌病尤其是药物诱发的心肌损伤提供一种新的治疗方法。材料和方法动物模型建立和分组64只小鼠[雄性，体重（30±5）g，8周龄，由上海动物实验中心提供，证书编号（scxk-）]随机平均分为ADR组、ADR+芪参益气Ⅰ组、ADR+芪参益气Ⅱ组和对照组。ADR组：每天灌胃给予小鼠生理盐水（1ml/g），并腹膜内注射ADR（盐酸阿霉素注射剂4mg/kg），每周两次，持续4周；ADR+芪参益气Ⅰ组：小鼠腹膜内注射ADR，每周两次，每次4mg/kg，持续4周，第3周开始灌胃给予芪参益气滴丸（天士力制药股份有限公司提供，批号Z），每天3.5mg/g，持续4周；ADR+芪参益气Ⅱ组：小鼠腹膜内注射ADR每周两次，每次4mg/kg，持续4周，同时每天灌胃给予芪参益气滴丸3.5mg/g，持续4周；对照组：每天灌胃给予小鼠生理盐水（1ml/g），同时腹膜内注射生理盐水（1ml/kg），每周两次，持续4周。每天观察小鼠的整体状态、体重变化和死亡数量。心功能测定第6周通过使用小型动物超声成像系统（VevoTM，加拿大多伦多市视觉声能有限公司）测定左心室舒张期末内径（LVEDD）、左心室收缩期末内径（LVESD）和左心室射血分数（LVEF），比较各组小鼠左心室的收缩功能。心肌组织病理学检查第6周采集各组小鼠的左心室心肌组织，用4%多聚甲醛溶液固定后，进行石蜡包埋、切片并采用伊红染色法（HE）染色。观察和比较心肌细胞形态。Bcl-Bcl-22和Bax蛋白检测提取小鼠梗死心肌组织中的总蛋白，取其中mg经12%十二烷基磺酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳后转移到聚偏二氟乙烯膜上，再加入已稀释的抗体在摇床上4°C孵育过夜。将膜清洗3遍，加入辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠免疫球蛋白G（IgG），孵育1h。清洗膜后固定，暗室曝光显影。用软件Bandscan4.3进行灰度分析。统计分析所有结果表示为均值±标准差。通过单因素方差分析和q检验法对结果进行比较。使用软件SPSS17.0执行统计分析。P0.05表示具有统计学意义。研究结果表各组小鼠左心室收缩功能评估（均值±标准差）小鼠的存活状况和总体状态观察ADR给药的小鼠出现脱毛、活动减少、食欲消退和体重降低。给药6周内共有10只小鼠死亡，其中ADR组4只、ADR+芪参益气Ⅰ组4只、ADR+芪参益气Ⅱ组2只。心功能观察与ADR组相比，ADR+芪参益气Ⅰ、Ⅱ组小鼠左心室功能明显改善，即LVEDD和LVESD显著减少（P0.05），LVEF显著增加（P0.05，表）。而与ADR+芪参益气Ⅰ组相比，ADR+芪参益气Ⅱ组的LVEDD和LVESD显著降低（P0.05），LVEF显著增加（P0.05）。以上结果表明，ADR所致小鼠心肌病模型成功建立；与ADR+芪参益气Ⅰ组相比，ADR+芪参益气Ⅱ组小鼠的心功能改善更为明显。心肌形态观察HE染色显示，对照组小鼠心肌纤维排列整齐，未发现肿胀或变性，细胞质一致，细胞间隙正常，但ADR组小鼠的心肌纤维呈无序排列，破裂细胞水肿，细胞间隙变大，局部出现液泡变性。与ADR组相比，ADR+芪参益气Ⅰ组和ADR+芪参益气Ⅱ组小鼠心肌细胞损伤程度降低（图1）。图1各组小鼠心肌组织的HE染**况A~D分别为ADR组、ADR+芪参益气Ⅰ组、ADR+芪参益气Ⅱ组和对照组Bcl-Bcl-22和Bax的表达情况与ADR+芪参益气Ⅰ组、ADR+芪参益气Ⅱ组和对照组相比，ADR组小鼠心肌组织Bcl-2表达显著减少、Bax表达显著增加（P值均0.05）。而在ADR+芪参益气Ⅰ、Ⅱ组中，ADR+芪参益气Ⅱ组小鼠较Ⅰ组小鼠心肌组织中的Bcl-2表达显著增加、Bax表达显著减少（P值均0.05，图2）。图2各组小鼠心肌组织中Bcl-2和Bax的表达情况讨论药物诱发心肌损伤是一种特殊的心肌病，其中化疗药物导致的心肌损伤十分常见。蒽环类抗癌化疗药物具有很强的心脏毒性，其中以ADR导致的心肌损伤最为严重。辅酶Q10、维生素E、维生素C、三磷酸腺苷、乙酰半胱氨酸和维拉帕米可保护心肌，并预防和降低心脏毒性。对于中药是否能控制化疗诱发的心肌损伤及其可能机制，尚无相关文献报导。芪参益气滴丸是融合了中医理论和现代制药技术，采用黄芪、丹参和三七的有效成分提取物，依靠现代科技制成的新药。近来有研究表明，芪参益气滴丸对冠心病二级预防具有良好效果，并对心力衰竭和心律失常具有辅助疗效。该药目前的主要适应证为冠心病。研究发现，芪参益气滴丸的主要成分黄芪具有保护心肌、抗凋亡和调节免疫作用，提示，该药或可缓解化疗药物诱发的心肌损伤。因此，本研究旨在通过建立ADR诱发心肌病的动物模型，观察芪参益气滴丸对化疗诱发心肌损伤的疗效，并探索其可能机制，从而为癌症化疗诱发的心肌病治疗提供一种新的选择。研究结果显示，与对照组相比，ADR组小鼠的LVEF显著减小，提示ADR诱发心肌病的小鼠模型成功建立。ADR+芪参益气Ⅱ组小鼠在ADR和芪参益气滴丸同时给药的情况下，较对照组小鼠心功能有所下降，但与ADR组相比，其心功能有显著改善。而ADR+芪参益气Ⅰ组芪参益气滴丸给药晚于ADR两周，即便如此，小鼠心功能下降同样得到了缓解。但与ADR+芪参益气Ⅰ组相比，Ⅱ组小鼠左心室功能改善更多。因此，即使心脏致毒药物已经使用了很长时间，芪参益气滴丸仍可改善小鼠左心室功能，且应用的时机越早越好。心肌HE染色显示ADR+芪参益气各组的心肌组织的结构性损伤轻于ADR组，这同样证实了芪参益气滴丸对ADR诱发心肌损伤的心肌保护作用。综上所述，本研究证实了芪参益气滴丸可缓解ADR诱发的心肌损伤。目前认为，ADR心肌病涉及了诸多机制，其中心肌细胞凋亡是最重要的机制之一，Bcl-2家族发挥了重要作用。基塔（Kitta）等发现ADR通过减少Bcl-2表达和增加Bax表达促使心肌细胞凋亡。本研究的结果显示，ADR组小鼠心肌组织Bcl-2表达减少和Bax表达增加均非常明显，ADR+芪参益气各组的情形有所改善。据此推测，芪参益气滴丸的心肌保护作用可能与其抑制心肌细胞凋亡有关。近来有研究表明，黄芪能够增强氧自由基清除剂超氧化物歧化酶的活性，减少脂过氧化和缓解自由基导致的心肌损伤，从而保护心肌。芪参益气滴丸中的丹参、三七和其他成分也能够增加冠脉血流量，降低血黏度，缓解缺血性心肌损伤，保护血管内皮，抑制炎性反应，抗凝血和抑制血小板聚集。总之，本实验表明，应用中药芪参益气滴丸能够有效治疗ADR诱发的心肌病，这可能与心肌细胞凋亡减少有关。至于芪参益气滴丸是否能够防止其他化疗药物和非药物诱发的心肌损伤，仍有待进一步研究证实。目前，芪参益气滴丸的人体研究正在开展，其结果也许能够为临床应用芪参益气滴丸治疗药物诱发的心肌损伤提供证据。[][本文摘译自《中国天然药物》（ChinJNatMed,11:

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